Transwell细胞培养设计

实验一:探究共培养条件分泌组是否有变化即细胞A和细胞B在共培养条件下其各自分泌组是否受到影响(暂且不讨论谁对谁的影响)。
设计实验:
1.使用Transwell培养技术,上层培养细胞A(细胞数设置为1*10^5个 <举例>)下层培养细胞B(细胞数设置为2*10^5个 <举例>)共培养h小时,从培养液中提取分泌蛋白(记为蛋白ⅰ)。

Transwell  1
2.相同培养条件 (培养基含量,细胞数,培养时间,温度等)设置两个Transwell:⑴上层培养细胞A(细胞数设置为1*10^5个 <举例>)下层不放置细胞,⑵上层不放置细胞,下层培养细胞B(细胞数设置为2*10^5个 <举例>),培养h小时,从培养液中提取分泌蛋白(记为蛋白ⅱ)。

Transwell 2-⑴                Transwell 2-⑵
3.质谱分析蛋白ⅰ和蛋白ⅱ的差别,初步分析共培养条件下分泌组是否影响。
4.置换细胞A ,细胞B培养的上下层条件,相同方法培养细胞,打质谱分析蛋白,分析结果是否与实验一有差别,进一步分析原因。

总结:该方法尽可能的同一了共培养和单独培养的差异,即排除了其他影响条件,只对比在共培养和单独培养条件下分泌组的变化 ,从而为得到可信数据提供了条件,对照分析了在共培养条件下与单独培养条件下分泌组的变化情况。缺点:由于细胞均未标记,即便结果显示共培养和单独培养分泌组确实有变化,仍无法得出两种细胞谁影响谁,由此,可利用标记培养基的方法,继续优化实验。
实验二:优化设计,将单独培养的细胞A培养基用Leud-d标记,细胞B用Lys-C13 标记,而对共同培养的Transwell不做任何标记。如图所示:
 
Transwell 1
 
Transwell 2-⑴                  Transwell 2-⑵
同实验一,经过相同条件的培养,提取分泌组,质谱分析(另做A  B细胞上下层交换的实验),对比单独培养并分别标记与共培养但不标记条件下分泌组的变化,从而得到两种细胞在共培养条件下是否影响彼此分泌组的变化,并且可以得出是谁影响谁,还是两种细胞都有影响。 

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