人的外周血淋巴细胞培养

   淋巴细胞是免疫系统中**重要的细胞,在免疫中起关键作用,维持内环境的稳定。对人的外周血淋巴细胞进行染色体核型分析对人类遗传研究及临床应用有重大意义。每一物种都有一定数目及一定形态结构的染色体,可在显微镜下观察到。本次实验的目的就是掌握人体微量血液体外培养制备染色体标本的方法并学习对人的外周血淋巴细胞进行核型分析。
每1ml 外周血中一般含有约1~3×106个小淋巴细胞, 几乎都处于G1期或G0期的非增殖状态 ,一般情况下是不再分裂的。但当在培养液中加入植物凝血素(PHA)后,淋巴细胞受刺激便转化为淋巴母细胞,重新进入增殖周期,进行有丝分裂。经过66~72小时(三个周期)的短期培养,秋水仙素的处理,低渗和固定,就可获得大量的有丝分裂相细胞,从而进行染色体标本制备和核型分析。这种微量全血培养技术已在临床医学、病毒学、药理学、遗传毒理学等方面得到了广泛应用。
本实验采取了人类的外周血进行实验,经各种技术处理后**后得到较为清晰的人体染色体照片。 通过实验发现:人类每个体细胞有46条染色体,22对常染色体和一对性染色体,男性是46,XY;女性是46,XX。 根据染色体的形态、大小、及着丝粒的位置,将人的外周淋巴细胞的46条染色体分为A、B、C、D、E、F、G7组共23种类型。
 
关键词  人的外周血淋巴细胞  染色体  低渗溶液    核型分析  秋水仙素  动物细胞体外培养
  
Human Peripheral Blood Lymphocyte Culture
 
 
Abstract: Lymphocytes are among the most important immune system cells in the immune plays a key role in together, in order to maintain a stable environment. To analyze chromosome of lymphocytes is very important. Various biological chromosome number and shape are constant,can be seen under a microscope. The purpose of this experiment is human body trace blood samples were cultured in vitro chromosome preparation methods and studying on the peripheral blood lymphocyte karyotype analysis on.
In human body's 1ml circumference blood includes approximately 1~3×106 the small lymphocyte generally, usually they are between time G0 and the G1 time, generally is not divided. But when adding plant in medium coagulopathy (PHA), lymphocyte transformation and stimulated for lymphatic mother cell proliferation capacity, make its recovery, then entering mitosis. After 66~72 hours(three cycles) short-term training, autumn grain processing, daffodil, low permeability and fixed can be gained lots of mitotic cells, for makes the chromosome specimen preparation and analysis. This kind of micro whole blood culture technique in aspects and so on clinical medicine, virology, Pharmacology, heredity toxicology obtained widespread application.
The experimental taken to conduct experiments on human peripheral blood, the various technical ultimately be treated more clear picture of human chromosomes. Through the experiments have found that each human somatic chromosome, 22 to 46 euchromosome sex chromosomes, and a pair of 46 XY; male is, Women are 46, XX. This method has been clinical medicine and virology, pharmacology, genetic toxicology etc widely. According to the chromosomes of the shape, size, and the centromere position, the peripheral lymphocytes 46 chromosomes into A, B, C, D, E, F, the G7 group of 23 types.
 
Key words: Human blood lymphocytes   Chromosome   Low permeability solution   
Karyotype analysis   Autumn daffodils element  zooblast in vitro raise offcenter
 
前  言 
细胞培养技术是目前生命科学研究领域的一项常用而重要的技术,它涉及的技术有:无菌操作技术、细胞分离技术、细胞培养技术、显微摄影技术、图像分析技术等。
Moorhead和Levan等(1960)建立的人体外周血淋巴细胞培养技术,以及Rothrels等(1958)建立的气干法制片技术,成了研究人与哺乳类染色体的**主要技术。这种取材简易、用血量少的培养方法已被临床医学、病毒学、药理学,遗传毒理学等方面广泛采用。细胞培养是一种程序复杂而又要求十分严谨的实验技术。要使细胞在体外长期生存,必须模拟体内环境,共给细胞存活所必需的条件。如供给适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖以及有关的生长因子;氧气及适宜的温度;注意调节其外环境的酸碱度(pH)与渗透压;以及为排除细胞代谢产物的危害,保持良好适宜的外环境而进行必需的传代等等。所有这一切条件与操作都要保持在无菌条件下进行。
人们对许多动植物的染色体进行广泛研究【1】,并取得了可喜成果,可对哺乳动物及人类染色体研究进展不大。其原因在于:1) 不易获得分裂过程中的细胞;2)过去的传统方法多为切片、压片,对描述染色体结构不准确,技术不高;3)人类染色体数目多,大小不同,彼此重叠。
1912年,Warfter **先研究人类染色体。
1923年,报道人类染色体的二倍体为48条。
1956年,J.H.Tjio A.Levan 培养人胚组织细胞,计数人体细胞染色体数为46条。
1960年,Moorhead建立人体外周血培养技术,使染色体的研究跃进一步。
1968年,T.U. Casperssan提出染色体显带技术。
自1956年Tjio(庄有兴)和Levan确定人类染色体数目为46个后,在1960年的Denver会议和1963年的London会议制定了统一的人类染色体命名体制:按照染色体的相对长度、臂比和着丝粒指数,将常染色体(22对)按大小用阿拉伯数字标记,顺次排列为1~22号,性染色体用X和Y标记;并按染色体大小和着丝粒位置,把人类染色体分为七个组,用大写字母A~G表示,把人的46个染色体分为7个群