如何确保您的CO2培养箱正常工作

毫无疑问,哺乳动物细胞的培养是生物医学研究中**重要的模型系统之一。尽管它们被广泛使用,但哺乳动物细胞相对脆弱并且需要特殊的生长环境。这种环境几乎完全由CO2培养箱提供。保持您的CO2培养箱正常运行且无污染对于哺乳动物细胞的成功培养**关重要。以下提示是开发自己的维护活动的起点。

避免污染

哺乳动物细胞在富含营养的培养基中培养,其温度有利于几乎任何所需或不需要的微生物的生长。尽管许多研究人员在其培养基中使用抗生素和抗真菌剂作为预防污染的方法,但这并不能解决持续的方法学错误,并且常常隐瞒存在问题的事实。如果可能的话,避免使用这些药剂,并努力改进您的无菌技术并开发一个系统,以保持您的培养箱清洁。

培养箱污染的主要来源是微生物通过检修门进入。这可能是显而易见的,但保持头脑**重要将有助于您养成在防止完全污染方面有很长一段路的习惯。将东西放入培养箱时,务必戴上手套,尽量缩短内玻璃门打开的时间。偶尔用70%乙醇擦拭门把手。每周更换一次,将水保持在湿度盘中。定期用肥皂和水擦洗锅,然后用乙醇擦拭; 或者,对锅进行高压灭菌。如果培养基溢出培养箱,请取下搁板并彻底清洁。

这些清洁仪式的频率取决于培养箱获得的流量。大型实验室中的培养箱可能需要更频繁的清洁。如果你从一个干净的培养箱开始,并注意进出的东西,它应该保持清洁数周或数月。

多个内门在门开启后增加温度和CO2恢复时间。

确保二氧化碳水平应该是它应有的水平

大多数哺乳动物细胞培养基使用碳酸氢盐缓冲系统。CO2是该缓冲系统的重要组成部分,必须保持在5%才能使培养基保持在生理pH值。虽然基本上所有现代培养箱都配备了CO2传感器来维持所需的CO2水平,但随着时间的推移,校准可能会偏离设定点,需要通过操作员直接确定CO2水平进行偏移重新校准(即,您)。

测量培养箱中二氧化碳水平的**简单,**准确的方法是使用气体分析仪,如Fyrite®设备。这些可以从许多科学供应商处购买,并且可以用于测量CO2或O2水平的模型。气体分析仪的操作基于在待测气体的化学吸收之后的流体的体积膨胀。使用室内空气(0.04%CO2)将设备“归零”,并通过培养箱门或侧面的端口对培养箱中的空气进行取样。

较旧的模型培养箱可能需要更频繁的重新校准。**好的新型号每个月都会对CO2传感器进行自动重新归零。虽然这些型号很少需要手动重新校准,但用户仍应根据其标准操作程序(SOP)的规定,使用Fyrite装置检查腔室CO2水平。

保持37°C的温度

鉴于我们的身体努力保持37°C的核心温度,因此培养的哺乳动物细胞在这个温度下**快乐也就不足为奇了。大多数二氧化碳培养箱都配有一个显示内腔温度的显示器,但**好定期仔细检查,特别是如果你注意到细胞生长不理想或不典型的话。**好使用高质量的校准温度计来完成。打开外部和内部培养箱门并将温度计粘贴到玻璃门内部,以便在玻璃门关闭时从外部读取温度。在您离开实验室之前,请执行此操作。第二天早上,打开培养箱的外门,读取温度计。再一次,如果读数与37°C不同(并且温度计准确),

培养箱显示:精确的温度和CO2控制,可实现高细胞产量和活力。

保持潮湿

培养箱的内部保持在相对较高的温度,因此培养基的蒸发将成为没有高??湿度的真正问题。通过将水保持在位于培养箱底部的托盘中,可以在培养箱内保持较高的相对湿度(90%**95%)。这样做的缺点是充水托盘是潜在的污染源(见上文)。

采用定期的维护和清洁计划是保持CO2培养箱正常运行且细胞无污染的**有效方法。


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