避免与其他细胞类型的组织培养污染

全球生物标准协会(GBSI)进行的在线调查结果证实了许多细胞科学家已经知道的情况。

超过一半的受访者--52% - “从未”对他们实验中使用的细胞系进行认证或其他与物种相关的质量控制测试。根据调查结果,百分之四十四的人从未进行过STR(短串联重复)DNA分析,这是公认的认证标准。

虽然受访者更有可能进行一些与无菌相关的微生物污染质量控制,特别是目视检查,但这些措施通常不会检测到支原体细菌感染的细胞。

微生物污染和其他细胞类型的细胞和组织培养污染不仅影响所讨论的培养物,而且还影响实验结果的整体再现性。

随着细胞培养物用于生物研究,疫苗生产和用于个性化医疗和新兴再生医学应用的治疗性蛋白质的生产的持续增加,培养物污染仍然是一个重要的问题。根据过去十年对主要细胞库的提交,估计有18%**36%的细胞系可能被污染或错误识别。

例如,在2008年,通过STR分析分析了40个人甲状腺癌细胞系。仅获得了23种独特的特征,并且许多交叉污染细胞系不是甲状腺。这些细胞系先前已在甲状腺癌研究中使用了二十年。

由于这个问题的范围,NIH和许多期刊现在在批准或接受出版之前建议或要求细胞系认证,这使得科学家利用细胞培养进行研究**关重要。

避免其他细胞类型的污染

一般考虑

  • 一般保持良好的细胞培养实践:帮助确保单细胞类型的维护在任何时候只处理生物安全罩中的单个细胞系。
  • 在将其用于特定细胞系之间彻底清洁工作区。
  • 将设备专用于单细胞系,包括瓶子和细胞培养基和其他试剂的等分试样。
  • 清楚地标记瓶子; 等分试样也应清楚标记,并且不得在细胞系之间共享。
  • 定期清空废物容器并使用有效对抗微生物和细胞培养物的消毒剂。

采取具体的预防措施

  • 从信誉良好的细胞库中获取细胞系。
  • 开发和维护主要和工作细胞库的受控细胞库系统。坚持这些惯例有助于避免污染,交叉污染,以及每次连续传代培养都会增加的遗传和表型不稳定性。
  • 执行认证测试,包括STR分析,同工酶分析和污染测试。
  • 避免细胞系转移给同事。如果转移确实发生,细胞应附有验证材料完整性的综合文件。

从信誉良好的细胞库中获取细胞系,定期检查细胞系的特征,并实施良好的无菌技术将有助于避免交叉污染。DNA指纹图谱,核型分析和同种型分析可以确认细胞培养物中是否存在交叉污染。

连续监测培养细胞

通过相差显微镜定期检查细胞系形态和生长特征并与参考图像比较可以指示早期问题。这些线索包括在从冷冻储存中恢复后很快识别细胞系中的意外形态或生长特征,这可能意味着从储存中回收错误的小瓶。包括正确格式的细胞系名称的印刷标签必须具有适合于低温储存的粘合剂,因为不适当粘附的标签将分离,在库存中留下未标记的小瓶。

美国典型培养物保藏中心(ATCC)开发了一种人体细胞系认证标准,建议使用STR分析。可以在大多数可以执行分子技术的实验室中进行STR分析,从而为人类细胞系的鉴定提供简单,低成本和可靠的方法。

需要结合常规身份测试和对良好细胞培养实践的警惕,以提供有效的细胞培养并确保研究对于同行评审是可接受的。如果不遵守这些指导原则,将导致不良遗产和无效研究。

参考

1. Passim等人。使用未经验证的,过度传递的细胞系的成本:我们需要多少数据?生物学技术。2007年11月; 43(5):575,577-8,581-2。

爱德华伯内特博士,博士。James Cooper,细胞系交叉污染的检测和预防:Biowire 2012春季,19-2.1

3. Shweppe等人:40个人类甲状腺癌细胞系的脱氧核糖核酸分析显示交叉污染导致细胞系冗余和错误识别。Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism,93卷,第11期,2008年11月1日,第4331-4341页。

4.大师,JR等。短串联重复分析为人细胞系提供了国际参考标准。Proc Natl Acid Sci US A. 2001年7月3日; 98(14):8012-8017。

5. Freedman,LP等。改变细胞培养文化:应用**佳实践和认证以确保科学再现性。2015年10月1日.Bio Pharm International Volume 28,Issue 10,pages 14-21。

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