微生物常见生化培养基

硝酸盐培养基
硝酸钾   0.2g
蛋白     5g
蒸馏水   1000ml
PH       7.4
制法:溶解,校正PH,分装试管,每管约5ml,121℃高压灭菌15min。
硝酸盐还原试剂
甲液:将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
乙液:将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
试验方法
  接种后在36±1℃培养1~4d, 加入甲液和乙液各一滴,观察结果。硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。 
  注:本试验阴性的原因有三:细菌不能还原硝酸盐;亚硝酸盐继续分解,生成氨和氮;培养基不适于细菌的生长。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许,可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。
氧化酶
1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:少量新鲜配制,干燥冰箱内避光保存。
1%α—萘酚—乙醇溶液。
试验方法
取白色洁净滤纸沾取菌落。加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并逐渐加深;再加α-萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。阴性于两分钟内不变色。
   以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同。
淀粉水解(生化试验培养基,用于产乳酸的链球箘的鉴定)
蛋白胨          10g
NaCl            5g
牛肉膏          5g
可溶性淀粉      2g
蒸馏水          1000mL
琼脂            15~20g
121℃灭菌20min
(PH7.6肉浸汤琼脂 90mL
羊血清5mL
3%淀粉溶液 10mL
普通肉汤  100mL
葡萄糖    0.2g
PH值7.5~7.7
用法:将肉汤液琼脂121℃高压灭菌15分钟,冷**50℃时,以无菌操作加入灭菌的淀粉溶液及无菌羊血清混合后,倾注灭菌平板备用。
明胶培养基(蛋白胨和牛肉膏提供氮源、维生素、矿物质;某些含明胶的细菌水解明胶,使其液化而降低明胶的胶凝作用)
蛋白胨     5g
牛肉膏      3g
明胶        120g
蒸馏水      1000mL
制法:将上述成分混合,置流动蒸汽灭菌器内,加热溶解,校正PH**7.2~7.4,用绒布过滤。分装试管,121℃灭菌15min,备用)
用法:1.用接种针穿刺接种
2.将试管置于35~37℃培养24h。
     3将接种物放于2~8℃约10~30min,待降温后取出观察,如仍呈溶解状时即为明胶液化试验阳性,如凝固不溶者为阴性。
尿素琼脂(蛋白胨提供氮源,满足细菌生长需要,氯化钠维持稳定的渗透压,葡萄糖为可发酵糖,磷酸二氢钾作为缓冲剂,酚红是指示剂,琼脂为凝固剂。用于细菌脲酶检测)
蛋白胨        1g
氯化钠        5g
葡萄糖        1g
磷酸二氢钾    2g
0.4%酚红溶液  3mL(酚红  0.012g)
琼脂          20g
蒸馏水        1000mL
20%尿素溶液  100mL(尿素  20g)
pH6.6~7.0
制法: 在蒸馏水或去离子水100mL中,加入上述所有成分(琼脂除外),混合均匀,过滤灭菌。将琼脂加入900mL蒸馏水或去离子水中,121℃灭菌15min,冷却**50℃,加入灭菌好的基本培养基,混匀后,分装于灭菌试管内,放成斜面备用.
试验方法:挑取琼脂培养物接种,在36±1℃培养24h,观察结果.尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。
三糖铁琼脂(TSI)(适合于肠杆菌科的鉴定。)
原理:用于观察细菌对糖的利用和硫化氢(变黑)的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1,只能利用葡萄糖的细菌,葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄,但因量少,生成的少量酸,因接触空气而氧化,加之细菌利用培养基中含氮物质,生成碱性产物,故使斜面后来又变红,底部由于是在厌氧状态下,酸类不被氧化,所以仍保持黄色。  而发酵乳糖的细菌(e.coli),则产生大量的酸,使整个培养基呈现黄色。  如培养基接种后产生黑色沉淀,是因为某些细菌能分解含硫氨基酸,生成硫化氢,硫化氢和培养基中的铁盐反应,生成黑色的硫化亚铁沉淀。
蛋白胨             20g
牛肉膏             5g
乳糖               10g
蔗糖               10g
葡萄糖             1g
氯化钠             5g
硫酸亚铁铵〔Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O〕 0.2g
硫代硫酸钠         0.2g