细胞培养污染 - 第2部分

正如在这个三部分文章系列的**部分中提到的,生物污染是每个细胞培养实验室的一个严重问题。了解更多关于如何防止它在第三部分系列关于细胞培养污染。

CO2培养箱在减少污染中的作用

这是关于细胞培养污染的三部分系列的第二部分。

正如在这个三部分文章系列的**部分中提到的,生物污染是每个细胞培养实验室的一个严重问题。由于对结果数据的可靠性有影响,因此将污染的发生保持在****低限度是**关重要的。讨论了污染的常见来源,在这里我们看看CO2培养箱的使用及其在提供安全环境中的作用,没有任何潜在的污染微生物。

细胞培养依赖于使用培养箱来维持保持细胞存活的正确条件。CO2培养箱专门用于模拟哺乳动物的生理条件。因此,培养箱将细胞所需的元件结合:37℃(98.6°F)的稳定温度,7.4**7.6的受控pH,与受控的CO 2水平和95%的高相对湿度平衡。不幸的是,哺乳动物细胞的理想环境也为我们身体内和身上的正常菌群的一系列生物污染物提供了理想的环境。这就是为什么理解良好的实验室实践以及如何选择合适的设备可以帮助减少污染是如此重要。某些CO2培养箱,例如,

正确:良好的实验室规范

良好的实验室操作是防止污染的**有效的方法。穿着一件带有弹性袖带的实验室外套,覆盖街头衣服,在开始任何细胞工作和戴一次性手套之前彻底洗手,工人可以大大降低潜在的污染。尽可能多地,文化主义者还应避免接触门把手,电话,计算器等物品; 避免佩戴首饰; 并绑回长长的头发。任何患有感冒或其他呼吸道感染的人应戴口罩,以尽量减少感染的潜在传播。

冰箱,冷冻箱,储物柜和长凳的工作区域和顶部应保持清洁,整洁,无灰尘。地板应定期清洁,特别是角落,以减少灰尘和污垢,由于交通在房间里的流通。此外,应清洁实验室设备(例如,机械移液器,涡流,水浴,离心机),并定期检查污染迹象。没有适当的无菌技术的替代品。文化和媒体应只在生物安全柜中打开,不应由人员共享。常见的污染途径是当培养基液滴保留在培养容器和其盖子之间或培养基瓶的颈部上时形成的液体“桥”进入。

二氧化碳培养箱作为培养细胞的家,是必须保持良好实验室操作的关键点。记住,哺乳动物细胞的**环境也是微生物伴侣的诱人环境。由于任何培养箱污染物的进入路径是通过敞开的门,需要建立一个将门开口保持**小的工作系统。尝试限制共享培养箱的人数,以减少污染源。设置标准和定期清洁程序(每周或每月),并立即使用70%酒精清除任何溢出物。

培养箱设计:保持污染检查

二氧化碳培养箱的设计可以是减少生物制剂污染的重要因素。有许多有用的功能,简化清洁,并提供持续保护,防止日常使用中的污染。这些能力区分培养箱的选择,重要的是认识到不同制造商的类似选项不一定提供相同的结果。

容易清洗

当孵育器易于清洁并且具有**小的内表面时,可以显着地控制微生物的存在。具有圆角的培养箱消除了裂缝和边缘,微生物可以隐藏和繁荣。电抛光的表面去除微小的凹陷,否则这些微小的凹陷将用作细菌的隐藏孔。

清洁培养箱时有几个好的规则:

  • 从培养箱中取出所有的培养基,并关闭。
  • 取出培养箱的所有独立内部组件,并使用肥皂消毒剂清洁它们。
  • 在高压灭菌器中消毒所有可移动部件。
  • 彻底清洁所有内表面,然后对所有表面涂抹消毒剂,并使其干燥。任何剩余的残余物可以使用蒸馏水除去。
  • 用70%的酒精擦拭所有表面,让它们风干。
  • 使用70%的酒精消毒培养箱的外部门和手柄。

如果存在水盘,向水中添加安全的抗微生物剂是一个好主意。在平底锅中使用蒸馏水,每周更换一次。在整个清洁过程中一定要戴手套和实验室外套,以尽量减少引入新的污染生物体。

高温消毒

在一些培养箱上可用的方便的选择是自动化高干热或湿热消毒循环。大多数这些设计为用空培养箱运行过夜。高热消毒提供了一个有效的方法,以确保培养箱的内部没有细菌,当你的细胞**进入培养箱在一个清洁周期后。有不同的制造商提供不同的选择,但不是所有这些都同样有效,2,3和用户应该决定哪个选项**适合他们的需求。

虽然消毒循环不能消除对常规清洁培养箱的需要,但它可以消除对单独高压灭菌内部部件的需要,并消除“驻留”污染的风险。

空气过滤

一些CO2培养箱上的一个常见功能是HEPA过滤器,其将过滤内部空气,去除微生物,微粒,气溶胶,甚**在一些情况下,挥发性有机化学品。100级HEPA过滤器应能快速提供洁净室空气质量,以便消除通过门进入的任何污染物。

考虑在开门之后获得**大空气质量所需的时间,特别是如果频繁的门开启是不可避免的。此恢复时间可能因制造商而异。4 HEPA过滤器需要少量维护,但应定期更换(即每六个月)以获得**佳效果。

抗菌表面

历史上,铜已被用作控制微生物污染的方法,包括细菌,病毒和真菌的微生物污染。包括阿兹台克人,希腊人和罗马人在内的古代文明使用铜作为皮肤病和伤口的局部治疗,5长期以来,铜管已被安全地用于储存水和其他食物。铜可以钝化酶并损伤细胞中的蛋白质,因为Cu 2+离子穿透细胞膜的孔并与酶的-SH基团反应,从而改变蛋白质结构。不锈钢和铝不抑制微生物的寿命,并且具有**小铜含量的合金显示更少的益处。抗菌效果与所用铜的量和质量直接相关。纯铜已被证明是**有效的抗菌表面材料,具有在仅1.5小时内灭活耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的能力。含有较少铜的合金,例如黄铜,显示出非常慢的响应和总体上相当低的抗微生物效果。5

一些二氧化碳培养箱提供了铜内部的选择以抑制当门打开时可能进入培养箱的任何细菌的生长。如上所述,只有100%的纯铜将在几分钟内有效地消除微生物污染物。固体铜中的Cu 2+离子不会变成空气传播,因此培养皿和烧瓶中的培养物没有风险。这是在细胞培养培养箱中具有连续抗微生物保护的伟大方式,其将持续培养箱的寿命,同时需要**小的维护。加利福尼亚生殖实验室的Imam El-Danasouri,一个长期使用铜衬的培养箱,解释说:“...铜培养箱减少加湿水或培养箱壁上感染的可能性。” 6

防护外部环境

大多数培养箱都有一个固体玻璃内门,以保护样品免于意外暴露于外部环境。分开的气密内门将进一步有助于**小化在门打开之后的暴露和速度恢复**设定条件。这个分开的内门可以提供三个或六个单独的较小的门,其允许进入培养箱的特定部分而不干扰其他区域。分隔的内门减少了微生物进入培养箱的任何机会,并使来自培养箱的热,大气和湿度的损失**小化。

外部水源

生命需要水,当然包括微生物。虽然他们喜欢在CO2培养箱内温暖,潮湿的气氛,水盘是特别邀请。通常将抗菌化合物,铜线甚**硬币加到水盘中。具有**应用或特别有价值的样品的实验室也可以考虑将加湿器水源移动到培养箱外部的培养箱设计,从而完全从培养箱内部去除这种污染源。

结论:战斗一场胜利的战斗

细胞培养物的生物污染是每个细胞培养使用者的偶然问题。污染每年花费数百万美元的时间和材料损失,否则可能花费在研究和开发上。虽然细胞培养物污染不能完全消除,因为微生物是我们的恒定伴侣,可以实施精细控制的过程以减少发作的影响。良好的无菌技术,清洁的实验室和对污染途径的了解,包括进入二氧化碳培养箱本身是**关重要的。二氧化碳培养箱的制造商是该过程的合作伙伴,现在提供许多选项,帮助**小化培养箱的污染。

在本系列的第三篇和**后一篇文章中,我们将介绍这里提到的预防措施和技术,使您能够自信地保持无污染的文化环境。

参考文献

  1. Freshney,RI,Culture of Animal Cells。Hoboken,NJ:John Wiley&Sons,Inc.,2010。
  2. Jaeger,D.,R.Leimbeck,“Total Thermal Disinfection of CO 2 Incubators,”Thermo Fisher Scientific,2009.ANCO 2 THERMDIS 0809。
  3. Dalmasso,JP,“Effective Heat Sterilization in CO 2 Incubators”,Thermo Fisher Scientific,2009。WPCO 2 EFH 1109。
  4. Thermo Scientific,“Importance of Class 100 Air in a CO 2 Incubator,”Thermo Scientific,2009.WPCO-2Class100 1109。
  5. Michels,HT,“Anti- Microbial Characteristics of Copper”,ASTM Standardization News 2006。
  6. El-Danasouri,I.,D.Schroen,“Preventing Cell Culture Contamination with Copper CO 2Incubators”,Thermo Fisher Scientific,2009。ANCO 2 PRECON 0809。