多种细胞的培养方法

HePG2细胞和L-02细胞的传代:
HePG2细胞属人肝肿瘤的恒生细胞株,L-02细胞则是人胎肝细胞株,二者所使用的培养基可以是一样的,即**常见的DMEM。一干使用低糖的。
细胞长满培养瓶时既要传代。使用胰酶消化即可。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。使用前37度预热,细胞经PBS清洗两遍后,每个中号培养瓶加0.7ml的胰酶,胰酶的量可根据自己培养瓶的大小而定,原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶以后,为使酶的活性**大,将培养瓶盖拧紧后放回培养箱中,3分钟左右即用含血清的培养基终止消化。如果在室温情况下消化,时间相应加长,可以在显微镜下观察,当细胞界限已十分清楚,即已分离为单个细胞,且有少量细胞漂起,则要终止消化了。
16HBE细胞株的传代方法:
镜下观察细胞生长融合达70-80%,准备传代。常规开紫外照射超净台20分钟,同时把含10%胎牛血清的MEM培养基、0。25%胰酶、PBS放置37度培养箱中孵育。20分钟后开始传代。先弃掉旧培养液,加PBS洗一次,然后加0。25%胰酶2ml消化(指25乘25cm大小的培养瓶)细胞,镜下观察细胞,细胞突起回缩,细胞变圆,然后将培养瓶放置37度二氧化碳培养箱中孵育3分钟左右(当然时间是随机的,比如:新配的胰酶作用时间短一些,配制时间长的胰酶作用时间会长一些,当然要不断地镜下观察),待细胞大部分消化下来(大部分细胞呈流沙状脱离瓶壁),加4ml含10%胎牛血清的MEM培养基终止消化。反复吹打瓶壁上残留的细胞,并将已消化下来的细胞吹打均匀,然后吸入离心管中1000转离心1分钟,然后弃掉上清,用手指将离心管中的细胞弹打均匀,加新培养基,吹打均匀,分**3个新的培养瓶中,补足培养液。将培养瓶平放,小心移入37度二氧化碳培养箱中培养过夜。次日观察。
胃癌细胞AGS和SGC-7901的培养:
细胞传代时不能长的太满,70%-80%就可以传了.实验前先把紫外灯打开照30分钟,然后再把鼓风机开10分钟,同时把培养液和胰酶放入37度水浴箱中,千万记住不要盖上水浴箱的盖子.传代时,我一般把培养瓶口过一下火,就直接把培养液到去,再用0.25%的胰酶(不含EDTA)消化.等细胞变圆,细胞间空隙加大就直接把培养液到去,不用离心,然后再吹打,虽说要轻柔,但很难吹打成单细胞悬液,所以稍用力也没有关系.虽然操作不规范,但节省时间,细胞也没有被污染.
AAV-293细胞的传代:
AAV-293细胞较喜欢成团生长,比较娇嫩,怕冷,传代时不要一次从二氧化碳培养箱拿出很多瓶,一次只要拿2-3瓶出来传就可以了,否则细胞很容易死掉.细胞在50-60%传代,细胞生长状态**好.
用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶消化半分钟左右,弃去胰酶.观察培养瓶是否有针孔样缝隙,如有就可以加入培养液吹打细胞.消化过久,对细胞损害很大,而且成团很难吹打成单个细胞.然后加入含有10%小牛血清的DMEM.轻轻放入二氧化碳培养箱中培养.
肺癌细胞(人类),其中绝大部分都是贴壁细胞,具体如:
(1) A549(肺腺癌)
(2) NCIH446(小肺细胞癌)
(3) 801(非小肺细胞癌)
(4) NCIH460 (大细胞肺癌)

在消化传代过程中,步骤基本一致:
吸去旧的培养液->用Hanks'(1X)清洗一两次->加入一定量的消化液(Trpsin-EDTA)->置显微镜下观察,待细胞大部分变圆时,回到超静台->吸去消化液->加入一定量的新培养液->反复吹打细胞->再置显微镜下观察,直到细胞全部悬浮起来->吸出一部分加入新的培养瓶中->**后再补充加入一定量新的培养液(RPMI1640with 10% FBS).
注意: 吹细胞时尽量多吹边角儿,此处细胞生长的多.另外吸出细胞前要混匀.
另注:消化液的配制方法:
Trpsin-EDTA(1X)--0.25% Trpsin with EDTA-4Na prepared with 2.5g Trpsin(1:250) and 0.38g EDTA-4Na/L in HBSS
小鼠前脂肪细胞(3T3-L1):
吸弃原培养液-->PBS洗一两次-->加入400ul0.125%胰酶(原代**好加0.05% EDTA)消化-->转动培养盘,保证整个盘面都被trypsin液润过->吸弃trypsin后37度消化3min-->以完全培液(DMEM+10% FCS+1/1000Biotin+1/1000泛酸钙-->吸打(枪的吸力调****小),1:10接种,前后左右摇晃培养盘,细胞均匀后放入培养箱继续培养(10%CO2 ,37度)
MDBK(牛肾细胞)类型:贴壁细胞
来源:购自武汉病毒所细胞保存中心
由四川农业大学动物生物技术中心繁殖保存
传代步骤:
弃去旧的生长液-->用无钙镁水(CMF)冲洗贴壁细胞数次(视细胞瓶的大小,3--5次)-->剩少许CMF,滴入 ATV 2--3滴-->摇匀细胞瓶中的液体,使ATV均匀的分布到瓶里的没个地方-->放入37度二氧化碳温箱中3--5min消化-->弃去ATV,加入生长液,拍打吸吹下细胞-->镜下观察-->分瓶-->作好记号,放入37度二氧化碳温箱生长
细胞特点:该细胞生长力强,而且快速一般24h就可以张到80%,48h不传就会变的很老,所以该细胞传时要勤点;我感觉MDBK还是很好传的,比以前我传的ST、Vero细胞等要好传一些,且不那么容易死亡,所以是我的一个比较好的选择!该细胞适合接种疱疹病毒(如:伪狂犬病毒)!
BHK-21:
弃除旧的培养液后---用缓冲液冲洗一遍----用0.22%的胰酶消化液消化约两分钟左右可以看到细胞像沙子一样脱落-------赶紧倒掉胰酶加入含10%的牛血清培养液终止消化。但目前国内能找到的BHK-21细胞大部分都有支原体感染,如果是好的BHK-21细胞能做到1比20的分种率。

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