血清使用问题的总结

一、血清灭活问题。
1、问:加到培养基中的血清必须灭活吗? 
答:不是必须的,看做什么实验了。
2、问:四季青胎牛血清灭活是56℃30分钟吗?
答:如果用于培养大多数的肿瘤细胞,血清一般是不需要灭活的,这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞,如内皮细胞,血清是需要灭活,一般是56℃,30min。
3、问:我要做滋养细胞培养,胎牛血清要灭活吗?
答:进口的一般都已灭活,国产的不一定,**好还是灭活一下再用较安全。
4、问:我用病毒上清转染细胞,培养用的血清需要灭活吗?因为血清中可能有些补体和抗体,是不是会影响转染?我想未灭活的血清中含些抗体补体可能会和病毒相结合,影响转染,正确吗?细胞是单核细胞白血病细胞,病毒是病毒包装细胞PT67收集的病毒上清。为什么要用无血清培养基加病毒孵育几小时,目的是什么? 
答:血清一定要灭活,可以先用无血清培养基加病毒孵育几小时以后再加血清。避免杂蛋白对病毒和宿主结合过程的干扰,一般是2-6小时,根据细胞的状态决定。血清不一定需要灭活,灭活的目的是将血清中的补体灭活!这要根据实际情况而定,如果没有把握那就灭活吧,也不麻烦56度半个小时。
5、问:(1)我买的是杭州四季青的新生牛血清,要灭活吗?有些说法是需要,有些说直接解冻后就可以加入到培养基中;我配制胰蛋白酶液,用的是D-PBS,有关系吗?
答:关于血清的热灭活,是很多人感兴趣也存在一定争议的话题。大多数实验室将血清的热灭活还是作为常规来执行,因为有两个作用,**是灭活补体,第二是灭活血清中可能存在的支原体。但是实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子、氨基酸等成分带来的负面影响。
我在实验室处理血清的时候,有一次水浴箱在灭活过程中出现故障,温度升高到80℃,血清变成了凝胶状,我重新处理了另外一份血清,将两份血清对比,发现高温直接影响到血清所含的抗体蛋白。在56℃下灭活半小时以上,肯定也会对里面的蛋白起到破坏作用。下次有机会我做个延长灭活时间的实验试试,看看到底有多大的影响。热灭活之后,血清放在四度冰箱久了,就会有沉淀产生,这常常会被认为是微生物污染或者是黑胶虫污染。为了验证到底有没有污染,常常又会把血清放置37℃温育,但是血清中的蛋白会进一步析出,**后还是要做镜检,无菌培养试验,和革兰氏染色试验,非常麻烦。
我看过一份资料,里面提到70%的实验者认为灭活是理所当然的。常规灭活建议的温度在45℃到62℃之间,而时间则从15分钟到60分钟不等。其中**常用的手法是56℃热处理30分钟。随着血清采集、处理、加工工艺的提高,许多早先认为是热灭活的原因已经不再成立,只有少数对血清进行热灭活的研究者在实验中证实了这一步骤的有效性和必要性。有人比较过11个不同细胞株,发现其中热灭活对6 个细胞株(HBAE,MDBK,Vero,成纤维细胞,MRC-5)的生长带来负面影响,三个细胞株(FOX-NY,MDCK和CHO-K1)不受热灭活的影响,而只有两个细胞株(Balb/3T3,Sp2/0Ag14 hybrid),在热灭活之后,细胞生长有轻微的改善。所以,在正常的操作下,热灭活通常对细胞的生长没有明显的促进作用。
你可以摸索一下,血清从-20℃冰箱拿出来之后在常温解冻,然后混匀分装成两份,一份灭活,一份不灭活,比较这两种血清对细胞是否有影响。然后再确定是灭活还是不灭活。这个过程**多也就一个星期。同时你还要考虑血清灭活与否对你后续的实验有没有影响。
问:(2)分装后的血清从-20℃取出放4℃让其液化,却见血清比较混浊,有沉淀产生,这属正常吗?
答:正常。
二、血清灭活时温度问题。
1、问:因为实验室水浴锅失控,血清灭活时,温度到了61.7℃,这血清还能用吗?
答:多长时间啊?短时间应该可以吧,我有一次加热了一个多小时,还照样用。
2、问:我灭活胎牛血清时,用的电磁炉,定在了70℃,本来说调温度到56℃再放血清的,后来忘了,就把血清放进去了,所以灭活的温度肯定超过56℃了,不知道这样对血清有没有影响?
答:常规灭活建议的温度在45℃到62℃之间,而时间则从15分钟到60分钟不等,其中**常用的手法是56℃热处理30分钟。看看你养的细胞是什么,一般的话估计问题不大,要是很珍贵的细胞还是慎重一点啊。热灭活目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质, 在对补体灭活以外,热处理同时也对血清中可能存在的支原体具有灭活作用。现在好像不主张热灭活,热灭活经常给血清产品带来负面影响,对血清的加热经常导致血清中沉淀的产生,此外,有研究结果证实热灭活步骤减弱了胎牛血清和小牛血清对细胞的促粘附作用。
三、血清的制备方法问题。
1、问:我的实验需要自己制备一些血清用于培养细胞,有没有人知道用于培养细胞的血清需要怎样的制备过程?
答:自己制备血清当心污染啊。如果无菌条件好的话,用静置析出方法就行。
2、问:一般我们用得胎牛血清用前还要灭活,我想用大鼠的血,不知道要不要灭活?
答:你直接把采来的血液在离心管里4℃过夜,离心,取上清,在无菌过滤,也可灭活,然后分装冻存,用时再配。
3、问:如果灭活会不会对血清中的一些因子有损伤?

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